LyGreen （20×in water） HRM染料 使用說明書

LyGreen (20×in water) HRM染料（20×水溶液）

產品描述

LyGreen™核酸染料是一種新型的的雙鏈DNA結合飽和熒光染料，是新一代用于HRM分析的熒光染料，也可用于實時定量PCR（qPCR）。該染料結構上由兩個單體染料分子通過一個彈性臂連接成一個二聚體，在沒有DNA存在時，該結構呈無熒光環狀結構，一旦有DNA出現，則恢復隨機形態并與DNA結合發出強烈的綠色熒光。

與市場上其他熒光染料如SYBR Green I 相比，LyGreen具有如下突出優點：1）高靈敏度：在推薦濃度下使用時可以獲得比SYBR Green I 更強的信號。2）準確：結合雙鏈DNA，變形時染料不遷移，熒光信號準確反映雙鏈DNA變化情況；過量染料形成二聚體，而不游離，使得LyGreen對PCR的抑制遠小于SYBR Green I，因此，使用LyGreen進行的qPCR實驗可以使用快速PCR步驟。3）高穩定性：在正常的儲存、操作和PCR過程中不會被破壞。在緩沖溶液中的染料可以安全的儲存在室溫或冰箱里，也可以反復凍融。4）安全性好：細胞膜穿透性測試表明，LyGreen幾乎不能穿透細胞膜，安全性高。5）兼容性：和SYBR Green I 光譜相似，使用不同品牌qPCR儀器時不許改變光譜元件設置，也無需改變操作步驟，qPCR完成后，無需加入其它核酸染料便能直接在凝膠成像系統下觀察分析。6）重復性好（如圖1.）：特殊設計染料，相同反應體系下，熒光信號釋放僅與雙鏈濃度有關，線性。

此外，LyGreen在做HRM分析時，相同反應條件下，熒光信號穩定而持久，重現性好。在微流PCR，恒溫擴增，毛細管電泳，DNA定量以及細胞活力鑒定等領域也具有的表現。本品以20×LyGreen水溶液形式提供（CAT#: D1003L5000 或D1003L5001）。另外，我公司也提供LyGreen HRM分析試劑盒（CAT#: D1101L1130），僅需添加引物和模板，可以體現LyGreen染料優點。

應用實例

圖1. LyGreen染料用于綿羊FecB基因HRM分析.

HRM分析設備為LightCycler@480熒光定量PCR儀(德國羅氏)

運輸與保存方法

冰袋運輸。4 ºC干燥避光保存，保質期12個月。

注意事項

1）做qPCR時注意設置陽性和陰性對照。

2）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 光學性質

激發波長= 497 nm

發射波長= 520nm

 實驗方法

PCR反應的配制（50uL）

注意事項

1)  請根據不同的儀器類型，不加入或加入合適濃度的參比染料ROX。該體系需根據所使用的Taq酶的不同進行適當優化；

2）根據實驗用量于冰上向無菌離心管中依次加入水，Taq poLymerase buffer, dNTPs, MgCl2, LyGreen, Taq poLymerase, and primers等配制qPCR反應體系（1×Master mix）；

3）將1×Master mix 適量分裝至無菌PCR管中，并加入DNA (50 ng/反應)；

4）按照儀器類型選擇合適的擴增程序。