CFDA, SE 細胞增殖示蹤熒光探針使用說明書

CFDA, SE 細胞增殖示蹤熒光探針

熒光標記細胞已被廣泛證實可有效確定總細胞的數量和一個樣本中存在多少活細胞。流式細胞術結合熒光染色法是分析非均質細胞種群的有力工具。非熒光性的FDA和它的衍生物分子進入細胞后被胞內無特異性的酯酶所水解產生熒光。這些熒光產物只能積聚在具有完整細胞膜的細胞中。因此，死細胞無完整細胞膜不能被染色。FDA及其類似物（如CDCFDA）精細的跨膜動力學以及胞內水解特點與細胞功能相關，因此FDA標記可以通過熒光顯微鏡或者流式細胞儀來檢測細胞。然而，因為CFSE和它的熒光類似物與GFP或者FITC具有相同的激發光譜，因此CFSE和它的熒光類似物不能用于GFP轉染細胞或者FITC標記抗體的應用中。VFSE染料與CFSE功能相似，因為它們都包含酯酶切割和胺反應的SE基團。VFSE染料能用于多色反應，因為VFSE與CFSE和它的熒光類似物具有不一樣的激發和發射光譜， 因此可以用于GFP轉染細胞或者FITC標記抗體的應用中。

運輸與保存方法

常溫運輸，-20℃干燥避光保存，保質期24個月。避免反復多次凍融。

使用方法

1.保存液配制（5mM）

按需配制，如取DMSO 360μL，溶解1mg CDCFDA，超音波溶解，得到5mM 保存液；將其按40μL體積分裝于避光的無菌凍存管中，-20℃可保存2個月。

注意：CDCFDA遇水容易分解，所以在配置時候要用無水DMSO，配置后計算用量盡快使用，多余的立刻避光保存-20℃。DMSO是有機溶劑，對于蛋白質會有損傷，所以在配置的時候DMSO用量越少越好；

2. 工作液配制

取5mM的CDCFDA稀釋液1 ul，加入1ml 10％FCS 的PBS稀釋。

3.染色

a.重懸細胞。用有5％FCS的PBS重懸細胞，細胞濃度一般為1x1x106/ml （體外實驗）或1x1x107/ml（轉染實驗）。

b.染色。1ml DFSE工作液與1ml細胞懸液混合后37℃孵育5－10分鐘。期間輕輕混勻兩次（用手輕彈管壁，切忌吹打）。

c.終止染色。用*培養液洗滌3次并離心。一般在第2次洗滌后再孵育5分鐘后進行第3次洗滌。冰冷的含10 %新生牛血清RPMI1640（先加入1ml混勻 ，然后續加入7ml）, 輕輕混勻1min（用手輕彈，切忌吹打）,1 500 r/ min 離心5 min。

d.流式細胞儀在FL1通道檢測。